Genomics and bioinformatics approaches in search of molecular pathomechanisms of saccular intracranial aneurysm : a complex disease

Publications of the University of Eastern Finland Dissertations in Health Sciences

isbn 978-952-61-1310-4

Publications of the University of Eastern Finland Dissertations in Health Sciences

d is se rt at io n s

Mitja Kurki Genomics and Bioinformatics

Approaches in Search of Molecular Pathomechanisms of Saccular Intracranial Aneurysm, A Complex Disease

Mitja Kurki

Genomics and Bioinformatics

Approaches in Search of Molecular Pathomechanisms of Saccular

Intracranial Aneurysm, A Complex Disease

High-throughput genomic methods generate huge amounts data that pose challenges for analysis and interpretation, requiring

bioinformatic methods. In this thesis, to study molecular mechanisms of saccular intracranial aneurysm (sIA) disease, two complementary approaches utilizing high-throughput genomics and bioinformatics were applied. Additionally, a bioinformatic method and software was developed.

Candidate genes and pathways were identified, which can serve as a basis for future research aiming to novel diagnostics, preventions, or therapies of sIA disease.

2

MITJA KURKI

2

"22!#"2 !"22

!222

2$!2#""22$!2

#!!2$!'"022 2 &2""2

e e e e e

)ee*,-(.e3e*,'#--#)(e) e."e/&.3e) e&."e#(-Re(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(e ),e

*/&#e2'#(.#)(e#(e/#.),#/'e>Re/)*#)e(#0,-#.3e)-*#.&Re/)*#)Re)(e./,3Re@=Q>>Re.e>@e e

e

/&#.#)(-e) e."e(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(e

#--,..#)(-e#(e&."e#(-e

?=?e e

/,)-/,!,3Re (-.#./.e) e&#(#&e##(Re"))&e) e##(Re

*,.'(.e) e/,)#)&)!3ReQ Qe#,.((e (-.#./.Re/&.3e) e&."e#(-Re(#0,-#.3e) e -.,(e#(&(e

/)*#)e

?=>@e e

e e

)*#$306e3e /)*#)Re?=>@e

#(&(e e ,#-e#.),-See

,) --),e&#c..#e)-'ReQQRe"QQe (-.#./.e) e&#(#&e##(Re.")&)!3e

/&.3e) e&."e#(-e e

,) --),e((&e/,/((Re"QQe

*,.'(.e) e/,-#(!e#(e /&.3e) e&."e#(-e

e

,) --),e&&#e,:"(Re"QQe

Q Qe#,.((e (-.#./.e ),e)&/&,e#(-e /&.3e) e&."e#(-e

e

,) --),e#e,(#,(.ReQQRe"QQe (-.#./.e) e&#(#&e##(Re*"."&')&)!3e

/&.3e) e&."e#(-e e

./,,e&#c%%e(.Re"QQeW*",'3Xe

"))&e) e",'3e /&.3e) e&."e#(-e

e

#-.,#/.),See

(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(e /)*#)e'*/-e#,,3e

QQ)2e>C?De cD=?>>e/)*#)Re#(&(e

"..*Saa111Q/ Q #a%#,$-.)e e

eW*,#(.XSeFDEcFB?cC>c>@>=cAe eW* XSeFDEcFB?cC>c>@>>c>e

eW*,#(.XSe>DFEcBD=Ce eW* XSe>DFEcBD>Ae

cSe>DFEcBD=Ce e

e

/."),Z-e,--Se /,)-/,!,3e) e/,)(.,e /)*#)e(#0,-#.3e)-*#.&e e

e e

/*,0#-),-Se -,"e#,.),e,,3e)(!Re"QQe

*,.'(.e) e/,)#)&)!3e /&.3e) e&."e#(-e

Q Qe#,.((e (-.#./.e ),e)&/&,e#(-ee (#0,-#.3e) e-.,(e#(&(e

e e e

,) --),e,()e&).#ReQQRe"QQe

(-.#./.e ),e)&/&,e##(e#(&(eW Xe (#0,-#.3e) e&-#(%#e

e e e

,) --),e/"eQe66-%&6#((ReQQRe"QQe /,)-/,!,3Re(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(e

/,)-/,!,3Re/,)(.,Re/)*#)e(#0,-#.3e)-*#.&e e

e e

0#1,-Se )(.e #,#-e)0..Re"QQe

*,.'(.e) e#)-#(-e (#0,-#.3e) e&-#(%#e e

e e

)(.e,)e#..)%&&#)Re"QQe

(-.#./.e ),e)&/&,e##(e#(&(eW Xe (#0,-#.3e) e&-#(%#e

e e e

**)((.Se ,) --),e##%%e#%%/&ReQQRe"QQe

e/0e (-.#./.e(e(#0,-#.7e.")&#+/ee)/0#(e e

e e

e e

e e

e e

/,%#Re#.$e

()'#-e(e#)#( ),'.#-e**,)"-e#(e,"e) e)&/&,e.")'"(#-'-e) e/&,e (.,,(#&e (/,3-'Ree)'*&2e#--Qee

(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(Re/&.3e) e&."e#(-Re?=>@Qe

/&#.#)(-e) e."e(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(Qe#--,..#)(-e#(e&."e#(-e/',e?=?Qe?=>@Qe>??e*Qe eW*,#(.XSeFDEcFB?cC>c>@>=cAe

eW* XSeFDEcFB?cC>c>@>>c>e eW*,#(.XSe>DFEcBD=Ce eW* XSe>DFEcBD>Ae cSe>DFEcBD=Ce e

ABSTRACT

-*#.e'--#0e ),.-e.)e&/#.e."e!(.#e(e')&/&,e-#-e) e)'')(e)'*&2e

#---Re #(#.#0e (-1,-e ,'#(e &/-#0Qe "#-e ."-#-e )/--e )(e ."e ')&/&,e '"(#-'-e) e-/&,e#(.,,(#&e(/,3-'eW- XRee)'*&2e.,#.Qe"e,/*./,e) e- e#-e ."e&#(!e/-e) e(/,3-'&e-/,"()#e"'),,"!Ree0-..#(!e ),'e) e-.,)%Qe

#!"c.",)/!"*/.e!()'#e'.")-e(e!(,.ee-#'/&.()/-e----'(.e) e."e.#0#.3e ) e."e"/'(e!()'Re/.ee,1%e#-e"/!e')/(.-e) e.e.".e*)-e!,.e"&&(!-e ),e (&3-#-e (e #(.,*,..#)(Re ,+/#,#(!e #)#( ),'.#e '.")-Qe ",e )'*&'(.,3e

**,)"-e /.#&#4#(!e "#!"c.",)/!"*/.e !()'#-e (e #)#( ),'.#-e ,e **&#e #(e ."#-e ."-#-Qe #,-.Re # ,(-e #(e !()'c1#e !(e 2*,--#)(e *,) #&-e .1(e ,/*./,e (e /(,/*./,e - e 1&&-e 1,e -./#Re (e e (/',e ) e *).(.#&e *."13-e (e !(-e --)#.e1#."e."e- e,/*./,e1,e#(.# #Qe)(Ree()0&e#)#( ),'.#-e'.")e(e -) .1,e1-e0&)*Re##(!e#(e."e#(.,*,..#)(e) e#)&)!#&e'"(#-'-e, &.e3e ."e# ,(.#&&3e2*,--e!(-e#(e."e- e1&&-Qe-#(!e)/,e()0&e'.")Re1e!(,.e

"3*)."--e )/.e *).(.#&e &#(%-e .1(e .,(-,#*.#)(e .),-e )(.,)&&#(!e .,#'(.&e

*,)---e#(e."e- e1&&-Qe"#,Re1e#(.# #e )/,e()0&e- e&)#e#(e#((#-"e(e/."e- e -'*&-e /-#(!e !()'c1#e --)#.#)(e (&3-#-Qe (e -/'',3Re 1e #(.# #e (#.e

!(-e(e*."13-Re1"#"e(e-,0e-ee-#-e ),e /./,e,-,"e#'#(!e.)1,-e()0&e

#!()-.#-Re *,0(.#)(-Re ),e .",*#-e ) e - e #--Qe #.#)(&&3Re ."e 0&)*e ()0&e

#)#( ),'.#e'.")e(e-) .1,e(e&-)ee/-e.)e-./3e).",e)'*&2e*"().3*-Qe e

.#)(&e#,,3e) e#&e&--# #.#)(SeeAC=Tee?CQBTee@BBeTeeAC=TeeACBT eBB=QBQ

#&e/$.e#(!-Se#)#( ),'.#-Te(.#-Te()'#-Te (.,,(#&e(/,3-'Te/,"()#e '),,"!Te(e2*,--#)(e,) #&#(!Te()'c#e--)#.#)(e./3

e e e

e

e e

e e

/,%#Re#.$e

()'#-#e $e #)#( ),'.##0#-#6e '(.&'#6e ')(#.%#$6#-(e -%%/&,#-(e #(.,%,(#&#-(e

#0)0&.#')(/,3-'./#(e')&%/&,#-.(e'%(#-'#(e./.%#'/%---Qe .6c/)'(e3&#)*#-.)Re.,03-.#.#(e.#%/(.Re?=>@e

/&#.#)(-e) e."e(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(Qe#--,..#)(-e#(e&."e#(-e/',)e?=?Qe?=>@Qe>??e-Qe e

eW*,#(.XSeFDEcFB?cC>c>@>=cAe eW* XSeFDEcFB?cC>c>@>>c>e eW*,#(.XSe>DFEcBD=Ce eW* XSe>DFEcBD>Ae cSe>DFEcBD=Ce e

TIIVISTELMÄ

&#-.(e ')(#.%#$6#-.(e ./.#(e ')&%/&,#-.e '%(#-'#.e #06.e )&e .63-#(e ./((../$Re 0#%%e (##(e ./.%#'/%-(e )(e '#&'(&$/#--.#e *()-.../e "/)'..0-.#Qe 6--6e 06#.:-%#,$--e %-%#.3.66(e -%%/&,#-(e #(.,%,(#&#-(e #0)0&.#')(/,3-'(e W- Xe ')&%/&,#-.(e '%(#-'#(e ./.%#'/%-(Qe - e )(e ')(#.%#$6#((e ./.#Re $)--e '/))-./((e(/,3-'(e*/"%'#((e#"/..e"(!(0,&&#-(e&/%#(%&0)(&#-(e 0,(0/))(Qe ),(#.e %),%(e %*-#..#(e !()'#-.e '(.&'6.e '")&&#-.0.e ''Qe

%#%%#(e #"'#-(e !(#(e %.##0#-//(e '#..'#-(e -'(#%#--.#Qe 6'6e !()'#-.e '(.&'6.e ./)..0.e 0&.0-.#e '#../-.#.)Re $)(%e (&3-)#(.#e $e ./&%#(.e )(e /-#(e

"-.&&#-.Qe #)#( ),'.##%%e .#.(&(e -)0&.e $e %"#..66e !()'#-(e .#)(e (&3-)#(.#ce $e ./&%#(.'(.&'#6Qe 6--6e 06#.:-%#,$.3:--6e %63..##(e %)&'e .)#-#(e .63(.6066e&6"-.3'#-.*Re$)#(e0/&&e*3,#..##(e3''6,.6'66(e- S(e'/))-./'#-(e

$e*/"%'#-(e0#%/..0#e')&%/&,#-#e'%(#-'$Qe&/%-#e0,.#&.##(e0/).(#(e$e 0/).'..)'#(e (/,3-'#(e !(#(e #&'(.3'#-*,) ##&$e !()'#(&$/#--.#e $e ./((#-...##(e /-#.e 0/).))(e --)-#)#./(#.e -#!(&)#(.#,#..$6e $e !($6Qe /,0%-#e

%"#...##(e #)#( ),'.##0#((e '(.&'6e $e )"$&'#-.)Re $)#.e -)0&.'&&e (-#''6#-(e )-.3:(e'#../-.#.))(e*,/-./(e&/).##(e//-#e"3*).-$e- S(e*/"%'#-(e&##..30#-.6e '%(#-'#-.Qe )*/%-#Re %63..6(e !()'#(&$/#-.e --)-#.#)(&33-#6e -/)'&#-##(e $e

")&&(.#&#-##(e (63..#-##(Re ./((#-...##(e (&$6e //..e !(..#-.6e '//(()-.Re $).%e --)-#)#./0.e - S(e '/))-./'#-,#-%##(Qe ".(0.)(e 0)#(e .).Re ..6e 06#.:-%#,$.3:--6e ./((#-...##(e /-#.e %(#..#!($6e $e -#!(&)#(.#,#..$6Re $).%e 0)#0.e .)#'#e*)"$(e./.%#'/%-#&&Re$)#(e.6".6#'--6e)(e//-#e- c./#(e#!()-.##%%cRe-.)ce

$e")#.)'(.&'#6Qe"#...3e#)#( ),'.##0#((e'(.&'6e-)0&.//e&#-6%-#e'3:-e'/#(e

%)'*&%-#(e ().33**#(e./.%#'#-(Qe e

e

/)%#./-SeeAC=Tee?CQBTee@BBeTeeAC=TeeACBT eBB=QBQe

&#((e/)'&#((e-#-(-.)Se#)#( ),'.##%%Te()'##%%Te,#((:&&#-33-.#Te(/,3-'Te

#)(&)/"#(.Te#0)0,(%#,.)"6#,#:.eTe*)*/&.#)!(.##%%ee

e

e

e e

e

e e e e e e e

[/**)-e3)/e-/e#(e,%#(!e."e1&&e1#."e3)/,e"Qee (e1".Re."(Re1#&&e3)/e)e#(e."e(2.e&&U\e

.(#-91e,43ee e

e

^(&3e.1)e."#(!-e,e#( #(#.Re."e/(#0,-e(e"/'(e-./*##.3Re(e ]'e().e-/,e)/.e."e ),',Q^e

&,.e#(-.#(e

e e

e

e

".e$/-.e"**(Ue e1-e$/-.ee!/3e"**#&3e1,#.#(!e-) .1,e ),ee&#0#(!Re1#.")/.ee&/e )/.e (3.#(!e #)&)!#&Qe )1e e 'e )'#(!e e "QQe #(e ')&/&,e '##(a#)#( ),'.#-Qe e#e().e*&(e."#-Ve

"e1),%e*,-(.e#(e."#-e."-#-e!(e#(e."eQ e#,.((e (-.#./.e(e#(e."e,/.e

"))&e) e)&/&,e##(Re."e(#0,-#.3e) e/)*#)eae(#0,-#.3e) e-.,(e#(&(e(e ."e #(&e *,.e 1-e ,,#e )/.e #(e /,)-/,!,3Re /,)(.,e #(e /)*#)e (#0,-#.3e )-*#.&Qe

e 'e ")()/,e .".e ,) --),e ##%%e #%%/&e ),!(#4e .#'e #(e "#-e /-3e -"/&e (e

*.e."e#(0#..#)(e.)e.e-e."e)**)((.e#(e'3e."-#-Qe

e1(.e.)e."(%e$/(.e*,) --),-e #,#-e)0..e(e,)e#..)%&&#)e ),e*,c,0#1#(!e'3e ."-#-Qe)/,e)''(.-e(e-/!!-.#)(-e,&&3e"&*e.)e#'*,)0e."e-#(.# #e)(.(.e-e 1&&e-e."e,#&#.3e) e."#-e."-#-Qe

3e*-.e!,.#./-e!)e.)e'3e-/*,0#-),-e,) --),e/"e66-%&6#((Re,) --),e,()e

&).#e(e-,"e#,.),e,,3e)(!Qee)/,e)&&.#0e2.(-#0e2*,#(e#(e#0,-e #&-e ) e 2*,.#-e ,.e e -.#'/&.#(!e (e /.#)(&e -/**),.e (.1),%Qe ,,3e #,-.e

#(-*#,e(e'(.),e'e#(e."e #&e) e#)#( ),'.#-e(e-#e-#(e#(e!(,&Qe"e -,(#*#./)/-e '.#(!e 1#."e /"e !,e '3e 1),%e (e #(.,-.e .)1,-e '),e #,.e '#&e**&#.#)(e) e!()'#-e(e#)#( ),'.#-e#(e!(,&e(e#(e-/&,e#(.,,(#&e (/,3-'e #--e #(e *,.#/&,Qe ",e #-e -)e '/"e '),e #(e ."e .#&-e ."(e $/-.e ."e 0#&Qee

"(e'3e1),%e.))%ee!(.#e.1#-.Re e1-e ),./(.e.)ee&e.)e0#-#.e."e(!,e (-.#./.e

#(e ',#!e e (e '.e ,()e .",Qe e ,()e .))%e 'e )(e e -.e &(e ) e &,(#(!e #(e

"/'(e)'*&2e#--e!(.#-Qee

e 1#-"e .)e 2*,--e '3e ",. &.e ."(%-e .)e &&e ) e ."e )c/."),-e #(e ."e '(/-,#*.-e #(e ."#-e ."-#-Qee-*#&&3e().1),."3e1,e."e)(.,#/.#)(-e) e"QQe((c#-e6%%#((e ),e&&e ."e2&&(.e&c1),%e ),e."e.,(-,#*.)'#e.e/.#&#4e#(e.1)e) e."e-./#-e#(e."#-e."-#-e (e,) --),e**)e&6c,../&e ),e'%#(!e."e.,(-,#*.)'#e(&3--e*)--#&e#(e"#-e

&e-e1&&e-e#(!e2.,'&3e-/**),.#0e(e()/,!#(!Qe

"#-e1),%e1)/&e().e"0e(e*)--#&3e1#.")/.e."e/.')-.e#'*),.(.e&#(#&e-'*&e(e )"),.e )&&.#)(-Se (/,3-'&e .#--/e )&&.#)(e #(e &-#(%#e /,)-/,!,3Te (/,3-'e

*.#(.e .--e (e e )&&.#)(-e #(e /,)!/,!,3Re /)*#)e (#0,-#.3e )-*#.&Te (/,3-'e )"),.e #(e .,"e #&e (.,Te (e e )&&.#)(-e ) e #((#-"e *)*/&.#)(e )"),.-e &-#(%#e #,."e )"),.e ./3Re ,#)0-/&,e #-%e #(e )/(!e #((-e ./3e (e ."e

&."?===e)"),.Qe3e-#(,e."(%-e!)-e.)e&&e) e."e*,.##*(.-e#(e."-e)"),.-e(e."e ,-,",-e(e&#(##(-e#(0)&0e#(e."e)&&.#)(e) e."-e)"),.-Qe

e

e 1#-"e .)e ."(%e &&e ) e ."e *)*&e e "0e 1),%e 1#."e ),e 1")e "0e ,.e (e '4#(!e (0#,)('(.e .)e ,,3e )/.e '3e ,-,"e #(e ,,3e )(!Z-e &e #(e ."e Q Q#,.((e (-.#./.Re (#0,-#.3e ) e -.,(e #(&(Te /,)(.,e ) e /)*#)e (#0,-#.3e )-*#.&e WXTe /,)-/,!,3e ) e &-#(%#e (#0,-#.3e (.,&e )-*#.&e WXRe (e #((#-"e (-.#./.e ) e )&/&,e##(eW XQee

*#&e."(%-e!)e.)e-,.,#-e#$e-((e.ee(e,#e#0#%%)e.e e ),e&&e) e 3)/,e--#-.(e/,#(!e."-e3,-Qee"e e*,-)((&Re-*#&&3e)'#e#')((Re.e e ,e."(%e ),e2&&(.e."c-/**),.e ),e."e e)'*/.,e&/-.,Qe

#!"e #0-e .)e (13(e %)/&/*)$.e ,,#Re #%/Re -#Re ,%)Re (..#Re #%%)Re /"e ),e ."e -/**),.e (e ."e *)--##&#.3e .)e 1),%e *,.c.#'e #(e ."e ,&3e 3-e ) e '3e 0#.#)(e .)1,-e

#)#( ),'.#-Qe")-e3,-e1,e.)/!"e.e.#'-e/.e''),&e(e/.#)(&Qe/&&(e

##((e%#,)#&'(Ve

)"))e.)e."e '#&3e) e')&/&,e#)&)!3e ),e!#0#(!ee,%e.e."e-*,#(!Ve

e !,. /&&3e %()1&!e ."e '3e ) e #(&(Re 36(e 3%%##e 0)&&c /(Re (e ."e ,/.e "))&e ) e )&/&,e '##(Re (#0,-#.3e ) e -.,(e #(&(e ),e #((#&e -/**),.Re1"#"e'e."#-e1),%e*)--#&Qee

"e (./,e 0-Qe (/,./,e .e #-e ().e (e #--/e 1"(e .&%#(!e )/.e '#&3e -e )."e )'*)((.-e&,!&3e)'e ,)'e."e-'e-)/,Qe"(%e3)/e ),e.")-e.)e')'e(eQe3e -#-.,e#(e1-e+/#.e(()3#(!e.e #,-.eW3)/e&/!"e.e'e1"(e3)/e #,-.e-1e'VVXe/.e e ."(%e3)/e ),e."e ,#(-"#*e1e"0e0&)*e-#(e."(Qe

e

e#!e*1e!)-e.)e/ /-e["e#!e/,,\e(e/)& e[%..#',-/\e ),e&)1,#(!e'3e&))e

*,--/,e #(e ,#.#&e .#'-e /,#(!e ."e *,)--Qe #(&&3Re ."e !,.-.e -/**),.e .".e (3)3e )/&e")*e ),e"-e)'e ,)'e3..&#Qe e1(.e.)e."(%e3)/e ),e*/..#(!e/*e1#."e-)e'(3e) e [)(e) e'3e #(-.e+/&#.#-\Re ),e#(!e."e0)#e) e,-)(e.e."e')-.e.)/!"e.#'-e(e ),e 3)/,e/()(#.#)(&e&)0Qe)/e,e."e-/(-"#(e) e'3e&# Ve

e

/)*#)Re.),e?=>@e e

#.$e e e e e e e e e (

#-.e) e."e),#!#(&e*/&#.#)(-ee

2

"#-e#--,..#)(e#-e-e)(e."e )&&)1#(!e),#!#(&e*/&#.#)(-See

/,%#e `Re6%%#((e`Re,:-(eRe/&')eRe0)(e/(e4/e,/(,!eRe)(!e Re ,)'*e Re #'&6e Re ,(-(#'#e Re 66-%&6#((e Re &6c,../&e Qe

*,!/&.e -#!(&#(!e *."13-e #(e ,/*./,e "/'(e -/&,e #(.,,(#&e (/,3-'e 1&&Se (e ',!#(!e ,!/&.#0e ,)&e ) e )&&c&#%e ,*.),e -#!(&#(!e (e (/&,e .),cRe "3*)2#c#(/#&e .),c>Re (e e .,(-,#*.#)(e .),-Qe /,)-/,!,3eCES>CCDcDBRe?=>>e

e

/,%#e Re (((e Re .),0#%e Re &6c,../&e Re 66-%&6#((e Re 0)(e /(e 4/e ,/(,!eRe)(!eRe"%)((eQeSe (*((.e(,#"'(.e(&3-#-e ) e(e.-Qee#)#( ),'.#-e>?S>D>Re?=>>

/,%#e Re5&eRe../((eRe(..#&eRe0(Z.e) eRe0)(e/(e4/e,/(,!e Re &#-&'#e Re #&./((e Re ".)e Re #0#-,#e Re )#0#-.)e Re )(%#((e Re

#((e Re #'(3e Re ,'/&(e Re ,#%--)(e Re ,)'e Re /(&e Re

".#'6%#e Re #.%,#e Re &)'e Re /#!,)%e Re #(%&e Re #'&6e Re ,(-(#'#e Re e %%,e Re #*..#e Re ,)&e Re &).#e Re 66-%&6#((e Qe

#!"c,#-%e *)*/&.#)(e #-)&.e ,0&-e &)1e ,+/(3e 0,#(.-e *,#-*)-#(!e .)e -/&,e#(.,,(#&e(/,3-'-Qe/'#..Qe

e

"e */&#.#)(-e 1,e *.e 1#."e ."e *,'#--#)(e ) e ."e )*3,#!".e )1(,-Qe "#-e ."-#-e

&-)e)(.#(-e/(*/&#-"e.Qe

`e+/&e #,-.e/."),-"#*e

e

e 2

4 C=================================================================================================================C4 5 CCC C=======================================================================================C6

?Q> ^eeeQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@

?Q>Q> ,#.#)(e#(e"/'(e!()'eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@

?Q>Q? #(%!e#-+/#&#,#/'eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeA

?Q>Q@ ()'e0,#.#)(e.&)!/-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeC

?Q>QA ./3#(!e"/'(e!()'e0,#.#)(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF

?Q>QAQ>#(%!e-./#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF

?Q>QAQ?(#.e!(e--)#.#)(e-./#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF

?Q>QAQ@()'c1#e--)#.#)(e-./#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>=

?Q>QAQA#--#(!e",#.#&#.3eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>@

?Q>QAQB+/(#(!e**,)"-e#(e!()'#e-./#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>@

?Q>QAQC().3*e#'*/..#)(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>A

?Q? ^ee eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>C

?Q?Q> !/&.#)(e) e!(e2*,--#)(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>C

?Q?Q? ./3#(!e."e.,(-,#*.)'eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe>F

?Q@ e eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe?>

?QA ^{e ee}W X^e eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe??

?QAQ> *#'#)&)!3eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe?@

?QAQ? #-%e .),-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe?@

?QAQ@ )&/&,e#)&)!3e) e#(.,,(#&e2.,,,&e,.,#-e(e

- e1&&eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe?A

?QAQA (.#-e) e."e- e#--eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe?B

?QAQB ")&e!()'e2*,--#)(e*,) #&#(!e) e"/'(e- e.#--/eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe?F

?QB ee e ee e

eee eeeQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@>

?QBQ> #)&)!#&e)3e) e%()1&!e(e#!#.&e,*,-(..#)(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@>

?QBQ? ."13e(&3-#-e'.")-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@C

?QBQ?Q>0,,*,-(..#)(e(&3--eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@C

?QBQ?Q?(,#"'(.e(&3--eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@D

?QBQ?Q@)*)&)!3e-e*."13e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@E

?QBQ@ "&&(!-e(e&#'#..#)(-e) e*."13e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@F

?QBQA ."13e(&3-#-e#(ee-./#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQe@F

?QBQB ( ,,#(!e,!/&.#)(e) e# ,(.#&&3e2*,--e!(-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeA=

?QBQC &/-.,#(!e#(e"#!"c.",)/!"*/.e!()'#e.e'#(#(!eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeA=

?QBQD /&.#*&e.-.#(!e/,(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeA>

6 C=====================================================================================================================================C76

7 C CC CC

CC CC?CC C CCCB CC CCCBΚ>C B C

B4>CCC CC==================================================C78 AQ> eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAB AQ>Q> .,#&-e(e'.")-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAC AQ>Q? .#(.-e(e#--/e'*&-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAC AQ>Q@ -)&.#)(e) e'e(e#,),,3e3,##4.#)(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAD AQ>QA #,),,3e.e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAD AQ>QB /(.#)(&e(&3-#-e) e# ,(.#&&3e2*,--e(-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAE 4.1.6 2e,(-,#*.#)(e.),e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAE 4.1.7 &#.#)(e) e#,),,3e.eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAF AQ? eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeAF AQ@ eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeBA AQA eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeBE

8 ?C C C CCC

C============================================================================================================================================C8<

BQ> eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeBF BQ? eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeC?

BQ?Q> -,#*.#)(e) e."e'.")e(e.))&eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeC?

BQ?Q? 0#&#&#.3e(e,/((#(!e."e*,)!,'eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeC@

BQ?Q@ 3*#&e(&3-#-e &)1eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeCA BQ?QA (&3-#-e) e ),-%)&#(e .e)(e?F@e&&-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeCA BQ?QB e-/!!-.-e()0&e"3*)."--e) e-#!(&#(!e'"(#-'-e.#0e

#(e."e,/*./,e- e1&&eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeCA BQ?QC )'*,#-)(e) ee.)e).",e'.")-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeCE BQ@ eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeCE BQA eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeCF BQB ^eeeQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD=

BQBQ> (()..#)(e.e-)/,-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD=

BQBQ? (e&/-.,#(!e'.")eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD=

BQBQ@ &.#)(e) e(/',e) e&/-.,-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD>

BQBQA &/-.,e-..#-.#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD>

BQBQB ,)--#(!e) e')(-.,.#)(e'#,),,3e.e-.-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD?

9 C C C CCC

C C CC C

C============================================================================================================================C:6 CQ> eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeD@

CQ? eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeDB CQ?Q> -e0-Qe)(.,)&e(&3-#-e#(e#((#-"e(e/."e-'*&-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeDB CQ?Q? --)#.#)(e) e0,#(.-e.)e."e(/',e) e- -eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeDF CQ?Q@ (&3-#-e) e?+@@Q>e&)/-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeDF CQ?QA !/&.),3e&'(.-e.e#(.# #e&)#eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeE=

CQ?QB e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeE>

CQ@ eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeE@

CQ@Q> )/,e()0&e- e&)#eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeE@

CQ@Q? ?+?@Q@e&)/-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeE@

CQ@Q@ B+@>Q>e&)/-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEA CQ@QA C+?AQ?e&)/-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEA CQ@QB D*??Q>e&)/-e(e."e(/',e) e- -eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEB CQ@QC ,0#)/-&3e#(.# #eF*?>Q@e&)/-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEB CQ@QD ?+@@Q>e&)/-e1#."e*,0#)/-&3e#()(&/-#0e0#(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEB CQA ^eeeQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEC CQAQ> ./3e-'*&-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEC CQAQ? *&#.#)(e-.,.!3eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEE CQAQ@ ().3*#(!eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEE CQAQA '*/..#)(eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEF CQAQB e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEF CQAQC !#)(&e--)#.#)(e*&).-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEF CQAQD ,"e) e,!/&.),3e&'(.-e.e#(.# #e0,#(.-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeEF CQAQE ..#-.#&e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF=

CQAQF ,#.#&#.3e(&3-#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF=

: C C=================================================================================================C<4

DQ> cee eeeee eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF>

DQ>Q> .,(!."-e(e1%(----e) e**&#e"#!"c.",)/!"*/.e

**,)"-e#(e-./3e) e)'*&2e#--eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeF@

DQ>Q? (.,*,..#)(e"&&(!-e) e!()'c1#e-./#-eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeFA

DQ? ^{eee eee}

ee eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeFC DQ@ ^{e e e ee eee}

eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeFF DQA ^{eeee e}eQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQQeFF

; C===============================================================================================================C436

< C====================================================================================================================C438 e

e

e

e

,0#.#)(-e

e

e /.)-)'&e)'#((.e

*)&33-.#e%#(3e#--e

ee %#%e ( ),'.#)(e,#.,#)(e

e '4)(ee,0#-e

e ),)(,3e,.,3e#--e

e )(.,)&e&&&e ,+/(3e ee 3&#e(3&.e

')()*")-*".e

ee )'*&'(.,3e

)23,#)(/&#e#e

e e*,)$.e*)*/&.#)(Qe

."e,-#(.-e1#."e(-.,3e ,)'e(),.",(e(e1-.,(e /,)*e

" c-+ee ",)'.#(e

#''/()*,#*#..#)(e )&&)1e3e-+/(#(!e

e )( #(e (.,0&e

e )*3e(/',e0,#.#)(e

ee 3&#ee-*)(-e

&'(.e#(#(!e

e )'*/.e.)')!,*"3e

ee ),e(()..#)(Re0#-/&#4.#)(Re (e#(.!,.e#-)0,3e ee # ,(.#&&3e2*,--e e

e e

e *((.e(,#"'(.e

(&3-#-e

e )23,#)(/&#e#e

ee (,#"'(.e(&3-#-e ee 2.,(&e&-.#e&3,e

e 2*,--#)(e+/(.#..#0e.,#.e

e &)/-e

ee &-e#-)0,3e.e

ee (e2*,--#)(e'(#/-e

ee (e(.)&)!3e

ee (e.e(,#"'(.e

(&3-#-e

e ()'c1#e--)#.#)(e

-./3e

?===e "e&."e?===e./3e e &-#(%#e#,."e)"),.e./3e

e /'(e()'e,)$.e

>e 3*)2#e#(/#&e .),c>ee

e (.#.3e3e-(.e

e ( ,,e ,)'e#,.e--3e

ee (*((.e(,#"'(.e

(&3-#-e

e (.,(&e&-.#e&3,e e (-,.#)(e),e&.#)(e e ( ),'.#)(e."()&)!3e

ee 3).)e(3&)*#e) e(-e

(e()'-e

e #(%!e#-+/#&#,#/'e

e .-e*"&),#4#(e"3,)&-e

e #(),e&&&e ,+/(3e ee #&e,,&e,.,3e

'#e #,)e,#)(/&#e#e

'e --(!,e,#)(/&#e#e

ee #).#('#e(#(e

#(/&).#e*")-*".e

c%e /&,e .),c%ee

e 2.c!(,.#)(e-+/(#(!e

e )(c(!.#0e'.,#2e

.),#4.#)(ee

e "e*(e#)&)!#&e(e

#)'#&e(.)&)!#-e

e -e,.#)e

eeeeeeeeeeeee0,,*,-(..#)(e(&3-#-e ee /&#.3e)(.,)&e

e*&).e /(.#&c+/(.#&e*&).e

e 0#1e)'*/..#)(&e

(&3-#-e

ee )/-.e/&.#c,,3e0,!e

e #)(/&#e#e

c+e #)(/&#e#e-+/(#(!e

e .e,.#)e

,e ,#)-)'&e,#)(/&#e#e ee /,"()#e"'),,"!e - ee -/&,e#(.,,(#&e

(/,3-'e

- cee /,"()#e"'),,"!e ,)'e-/&,e#(.,,(#&e (/,3-'e,/*./,e e #(!&e(/&).#e

*)&3'),*"#-'e

ee #!(&&#(!e*."13e#'*.e (&3-#-e

e .,/./,&e0,#(.e

e ,(-,#*.#)(e .),e

e ,(-,#*.#)(e .),e#(#(!e

-#.e

e )&&c&#%e,*.),e

e )*)&)!3e-ee

.e ,(- ,e,#)(/&##e

e ,(-,#*.#)(e-.,.e-#.

e e e

) 2

)'')(e )'*&2e #---e -/"e -e ),)(,3e ,.,3e #--Re#.-e'&&#./-e .3*e ?Re (e-.,)%e *&e e "03e /,(e )(e */&#e "&."e ,e -3-.'-e #(e 0&)*e )/(.,#-Qe -*#.e ."e '--#0e ),.-e ) e ."e -#(.# #e )''/(#.3e .)e &/#.e ."e !(.#e (e ')&/&,e-#-e) e)'')(e)'*&2e#---Re."e /('(.&e-#-e,'#(-e&/-#0Qe"#-e

%()1&!e #-e (e ),e ."e 0&)*'(.e ) e ()0&e #'*,)0e *,0(..#0e '-/,-e -e 1&&e -e #!()-.#e (e .",*/.#e **,)"-Qe )'*&2e (e &,!&3e /(",.e )'#(.#)(-e) e!()'#e(e*#!()'#Re(0#,)('(.&Re(e&# -.3&e .),-e&#%&3e/-e )'*&2e#---eW/*-%#e.e&Qe?=>>Te,#(e?=>?XQe"e)'*&.#)(e) e."e"/'(e!()'e

*,)$.e #(e ."e !#((#(!e ) e ."e ?>-.e (./,3e ,0&e ."e @Q?e #&&#)(e &)(!e (/&).#e -+/(e) e."e?@e"/'(e",)')-)'-Re1"#"e)(.#(e')-.e) e."e",#.,3e'.,#&e#(e

"/'(e&&-Qe"e"/'(e!()'e(e*#!()'e,e."e&/*,#(.-e.".e'4#(!&3e!/#e ."e0&)*'(.e) ee ,.#&#4e!!e.)e(e/&.e"/'(e#(!Re)(-#-.#(!e) ee'/&.#./e) e

# ,(.e&&e(e.#--/e.3*-e(e),!(-e1#."e-*# #e /(.#)(-Qe"-e /(.#)(-e'/-.ee '#(.#(e .",)/!")/.e ."e #(#0#/&Z-e &# e (e *,)..e !#(-.e #(.,(&e (e 2.,(&e

#(-/&.-Re Q!QRe ,&.e .)e /("&."3e &# -.3&e ")#-e ),e 0#,&e #( .#)(-Qe #&/,-e .)e '#(.#(e ."-e /(.#)(-e#(e."e2.,'&3e)'*&2e#(.,*&3e) e0,#)/-e.#--/-e(e),!(-e'3e&e .)e."e0&)*'(.e) e0,#)/-e)'*&2e#---Qe

"#-e."-#-e )/--e)(e."e')&/&,e*.")'"(#-'-e) e-/&,e#(.,,(#&e(/,3-'e W- Xe #--Re e )'*&2e .,#.Qe "e 1&&e ) e ."e #(.,,(#&e ,.,3e #-e e ."#(e /.e "#!"&3e )'*&2e-.,/./,e.".e'/-.e1#."-.(e0,#)/-e-.,--),-e-/"e-e&))e*,--/,e(e-",e -.,--e),e.",)-&,)-#-e.",)/!")/.e."e#(#0#/&Z-e&# Qe),e&,!&3e/(%()1(e,-)(-Re#(e?c

@Ge) e."e*)*/&.#)(Re*,)..#0e'"(#-'-e #&Re&#(!e.)e."e ),'.#)(e) e- -e#(e."e ,("#(!e -#.-e ) e #(.,,(#&e 2.,,,&e ,.,#-Qe )-.e - -e ,e .))e -'&&e .)e /-e (/,)&)!#&e-3'*.)'-e(e!)e/(().#e/,#(!e&# Qe (e-)'e- e1&&-e."e'"(#-'-e) e '#(.((e (e *,)..#)(e #&e (e ."e (/,3-'e ,/*./,-Re /-#(!e e 0-..#(!e -/,"()#e "'),,"!e W- cXRe &)1e ) e "#!"c*,--/,e ,.,#&e &))e .)e ."e -/,"()#e-*e)(e."e-/, e) e."e,#(Re(e*)--#&3e&-)e.)e."e,#(e.#--/e(e ,#(e 0(.,#&-Qe (e ."#,e ) e - ce *.#(.-e '#..e .)e (/,)-/,!#&e ,e #e ) e )'*&#.#)(-e1#."#(e)(e3,Qe&.")/!"e- ce)/(.-e ),e)(&3e)/.eBGe) e&&e ),'-e ) e-.,)%Re#.e'#(&3e .-e."e1),%#(!e!e*)*/&.#)(Re/-#(!ee"#!",e&)--e) e*,)/.#0e 3,-e ."(e ."e .1)e '),e )'')(e ),'-e ) e -.,)%Re ,#(e #( ,.#)(e (e #(.,,,&e

"'),,"!Qe),e/(%()1(e,-)(-Re- ce#-e'),e)'')(e#(e#(&(eW)/.e>===e--e ((/&&3Xe(e*(e."(e&-1",e#(e."e1),&Qee

"

),(e "#!"c.",)/!"*/.e !()'#e '.")-e ,e (e ..,.#0e 13e .)e /(,0&e ."e ')&/&,e *.")'"(#-'-e "#(e )'*&2e #---Re &&)1#(!Re Q!QRe -./#-e ) e 1")&e

!()'-e) e*.#(.-e),e#(.,,)!.#)(e) e.,(-,#*.)'-e) e#--e.#--/-Qe"-e'.")-e ,e#(,-#(!&3e**&#e.)e/(,-.(e)'*&2e#---Qee)10,Re"/!e')/(.-e) e.e ,e !(,.Re (e ."e !,.-.e "&&(!e #-e '(#(! /&e #)#( ),'.#e (&3-#-e (e

#(.,*,..#)(e) e."e.e#(e.,'-e) e')&/&,e'"(#-'-Re)*.#'&e.",*#-Re(e&#%&3e )/.)'e) ee!#0(e#--e#(ee!#0(e#(#0#/&Qe

(e."#-e."-#-Re."e#'e1-e.)e&/#.e."e-#!(&&#(!e*."13-e) e- e,/*./,e(e."e

!(.#e%!,)/(e) e- e ),'.#)(Qe"#-e%()1&!e#-e(e ),e /,.",e/(,-.(#(!e ) e."e')&/&,e'"(#-'-e) e- e ),'.#)(e(e,/*./,e1"#"e)/&e*0e."e13e ),e ."e-#!(e) e()0&e'.")-e ),e()(c#(0-#0e#!()-#-Re*,0(.#)(Re(e)&/-#0e.",*3e ) e- -Qee

",e)'*&'(.,3e**,)"-e1,e**&#Qe#,-.Re!()'c1#e# ,(-e#(e!(e 2*,--#)(e .1(e ,/*./,e (e /(,/*./,e - e 1&&-e 1,e -./#Qe e )(Re e ()0&e

#)#( ),'.#-e'.")e(e-) .1,e1-e0&)*e.)e#e#(.,*,..#)(e(e!(,.#)(e) e

"3*)."--e ,)'e # ,(.#&&3e 2*,--e !(e -.-Qe "#,Re e !()'c1#e --)#.#)(e (&3-#-e1-e)(/.e.)e#(.# 3e()0&e!(-e)(.,#/.#(!e.)e- e#--e-/-*.##&#.3e#(e

#((#-"e(e/."e-'*&-Qee

(e ."e ,0#1e *,.e ) e ."#-e ."-#-Re ."e &(-*e ) e "/'(e !(.#-e -e 1&&e -e !(e 2*,--#)(e (e ,!/&.#)(e ,e ,0#1Qe 2.Re )'*&2e #---e ,e #(Re (e e

&#.,./,e ,0#1e ) e ."e )'*&2e - e #--e #-e *,-(.Qe #(&&3Re /,,(.e )'*/..#)(&e

*."13e(&3-#-e'.")-e#'e.e."e#(.,*,..#)(e) e# ,(.#&e!(e2*,--#)(e.e -.-e,e,0#1Qe

.,e*,-(.#(!e."e.",e-./#-e.".e ),'e."e-#-e) e."#-e."-#-Re."e)'')(e."'-e (e # ,(-e #(.# #e #(e ."e )'*&'(.,3e **,)"-e ,e #-/--Qe #(&&3Re -)'e 0(/-e) e,-"e,e(0#-#)(e ),e>Xe0(#(!e%()1&!e) e."e')&/&,e-#-e) e."e - e#--Re(e?Xe0&)*#(!e#)#( ),'.#-e'.")-e**&#&e ),e."e(&3-#-e) e.e

!(,.e3e"#!"c.",)/!"*/.e'.")-e)/.e)'*&2e#---Qe

#

* 2

2.1 THE HUMAN GENOME

"e #,-.e, .e#(e?==>eW(,e.e&Qe?==>Te(.,e.e&Qe?==>Xe(e."e #(&e)'*&.#)(e) e."e /'(e ()'e ,)$.e WXe #(e ?==Ae W (.,(.#)(&e /'(e ()'e +/(#(!e )(-),.#/'e?==AXe&#e."e )/(.#)(e ),e'),(e"#!"e.",)/!"*/.e!(.#Re!()'#Re(e /(.#)(&e!()'#e-./#-e) e"/'(e#---Qe"e*,#(!e"#-.),#&e'#&-.)(-e1,e ,1#(Z-e."),3e) e0)&/.#)(e(e#(",#.(e#(e>EBFeW,1#(e>EBFXRe(&Z-e)-,0.#)(e ) e,!/&,e#(",#.(e*..,(-e#(e*-e#(e>ECCeW(&e>ECCXRe."e#(.# #.#)(e) e."e #,-.e '(&#(e #--e &%*.)(/,#e #(e >F=?e W,,)e >F=?XRe (e ."e #(.# #.#)(e ) e ."e -.,/./,e) ee#(e>FB@eW.-)(e(e,#%Re>FB@XQee

"e e)'*#&ee(,e)'*&.e-#(!&e )(-(-/-e -*#,e -+/(e ) e ."e "/'(e

!()'e3e(&34#(!e."ee-+/(e) e )/,e#(0##/&-Se.1)e'&-e(e.1)e '&-Qe

"e *,)$.Re ),e ."e #,-.e .#'Re *,)0#e -.#'.-e )/.e ."e )'*)-#.#)(e ) e ."e "/'(e

!()'Qe (e?==ARe#.e1-e-.#'.e.".e."e!()'e)(.#(-e?=R===c?BR===e*,).#(e)#(!e

!(-Re 1"#"e ,e )(.#(e #(e &--e ."(e ?Ge ) e ."e .).&e !()'e -+/(e ) e -)'e .",e

#&&#)(e-*#,-eW (.,(.#)(&e/'(e()'e+/(#(!e)(-),.#/'e?==AXQe"e"/'(e , ,(e-+/(e#-e)(-.(.&3e#(!e#'*,)0e/*)(e#(e/,3e(e(()..#)(Qe&.e -..#-.#-e) e."e!()'e/#&e.e."e.#'e) e1,#.#(!e."#-e."-#-e,e-")1(e#(e&e>Qee

&&e 1),%e *,-(.e #(e ."#-e ."-#-e #-e ,#.#&&3e *((.e )(e ."e e (e -/-+/(.e

!()'e(()..#)(-Qe"e%()1&!e) e"/'(e!()'e)(-(-/-e-+/(e(e0,#.#)(e (&-e."e-#!(e) e."()&)!3e.)e-./3e."e.,(-,#*.)'eW./3e Xe(e!()'eW./3e Xe #(e e !()'c1#e '((,Re (e #.e #-e &-)e ,#.#&e ),e ."e )'*/..#)(&e '.")-e

*,#.#(!e ."e ,!/&.#)(e ) e !(e -.-e ).#(e 3e 1")&c!()'e .,(-,#*.)'#e -./#-e W./#-e e(e XQee

e

5=4=4 *!,!'&C!&C -%&C&'%C

"e "/'(e , ,(e -+/(e #-e -e )(&3e )(e e 1e #(#0#/&-Qe )10,Re '(3e

# ,(.e.3*-e) e0,#.#)(-e2#-.e.1(e#(#0#/&-eW&e?XQe"e-+/(e.1(e.1)e

"/'(e#(#0#/&-e#-e-.#'.e.)e# ,e3e=Q>Ge/e.)e-#(!&e(/&).#e*)&3'),*"#-'e WXe0,#.#)(eW"e (.,(.#)(&e**e)(-),.#/'e?==BXRe/.e).",e.3*-e) e0,#.#)(e (e)/(.e ),ee.).&e) e=QBGe) e-+/(e# ,(eW03e.e&Qe?==DXQee

e0,#(.e #-e e "(!e #(e ."e(/&).#e -+/(e) e e !()'Qe,#(.-e #(e ."e "/'(e

!()'e,#-e ,)'e/(),,.e,,),-e#(ee,*&#.#)(e#(e#0##(!e&&-e.e(e-.#'.e ,.e) e)(e#(e0,3e#&&#)(."e-eW/&&)"ePe/(%&e?==EXQe (e#.#)(Re,#(.-e'3e )/,e /e .)e (0#,)('(.&e 2*)-/,-e -/"e -e ,#.#)(Qe e e 0,#(.e )/,-e #(e !,'c&#(e

$

&&-e (e *,)0-e .)e e ( ##&Re &#(!e .)e #(,-e -/,0#0&e (e ,*,)/.#)(Re ."e 0,#(.e 1#&&e )'e '),e )'')(e 1#."e 0,3e !(,.#)(e #(e e *)*/&.#)(e de ."e -#-e ) e 0)&/.#)(Qe (e)(.,-.Re0,#(.-e.".e,e",' /&e#(e.,'-e) e-/,0#0&e(e,*,)/.#)(e,e /(,e(!.#0e-&.#)(e(e1#&&e,'#(e,,e),e0(#-"e#(e-/-+/(.e!(,.#)(-Qe,#(.-e .".e)e().e .e,*,)/.#)(e-/--Re#(!e /(.#)(&&3e(/.,&e),e .#(!e*,)#&#.3e ) e#---e.e)&,e!Re(ee,,#e(e#-.,#/.e,()'&3e#(e."e*)*/&.#)(Qe

,#(.-e.".e)/,e#(e&--e."(e>Ge) ee*)*/&.#)(e,e&&e'/..#)(-Re/.e# ee0,#(.e ,"-ee ,+/(3e) e>Ge),e'),e#.e#-e&&ee*)&3'),*"#-'Qe,#(.-e1#."ee ,+/(3e )0,e BGe #(e e *)*/&.#)(e ,e &&e '%%'&C .*!&,+C W"e >===e ()'-e ,)$.e )(-),.#/'e?=>=XQe,#(.-e)/,,#(!e.ee ,+/(3e.1(e=QBGe(eBGe,C&&C$'/C

*)-&1C .*!&,+>e (e .")-e #(e /(,e =QBGe ) e *)*/&.#)(e ,e &&e**C .*!&,+Qe 2.,'&3e ,,e 0,#(.-e -(Re Q!QRe #(e e -#(!&e '#&3e ,e &&e(*!.,C .*!&,+Qe "e 0)&/.#)(,3e *,--/,e )(e 0,#.#)(-e ,e 2'*&# #e 3e ."e .e .".e ."e ,+/(3e ) e )'')(e0,#(.-e,e,/e(,e!(-e(e,!/&.),3e&'(.-eW#e.e&Qe?==FTe"e>===e ()'-e,)$.e)(-),.#/'e?=>?XQe

5=4=5 !&#C!+)-!$!*!-%C

,#(.-e .".e ,e &)-e .)e "e ).",e (a),e ().e -*,.e 3e ,)'#(.#)(e ").-*).-e ,e

&#%&3e.)ee#(",#.e.)!.",Qe"#-e*"()'()(e#-e&&e&#(%!Qe#(%!e#-+/#&#,#/'e WXe#-e."e)/,,(e) ee*#,e) e0,#(.e&&&-e#(ee*)*/&.#)(e'),e),e&--e) .(e."(e 2*.e3e"(Qe"e.,'ee(ee'#-&#(!e-#(e0,#.#)(-e(ee#(e--)#.#)(e 1#."e "e ).",e 1#.")/.e #(!e &#(%Qe e -#'*&e 2'*&e #-e 1"(e .1)e *)*/&.#)(-e 1#."e

# ,(.e ,+/(#-e) e0,#.#)(-e#(e.1)e&)#e,e'#2e.)!.",Te."e)'#(e*)*/&.#)(e (e #-*&3e #-+/#&#,#/'e .1(e 0,#.#)(-e 1#.")/.e .")-e 0,#.#)(-e #(!e &#(%Qee '.#e*"-e#-+/#&#,#/'e"-e(e/-e-e(e&.,(.#0e.)eeW&e.e&Qe?==DXQe (e ."#-e."-#-Re&#%e#(e')-.e-#(.# #e,.#&-e)(e!(.#e--)#.#)(e-./#-Re."e.,'ee#-e/-Qe

"(ee(1e'/..#)(e)/,-e#(ee!,'&#(e&&e",)')-)'eWQ!QRe2%e'/..#)(-e.ee ,.e) e**,)2#'.&3e>Q>ee>=^cEeeae-eae!(,.#)(eW)(,e.e&Qe?=>>XXRe#.e#-e)'*(#e 3e&&e).",e!(.#e0,#(.-e)(e.".e",)')-)'Qe)'#(.#)(-e/,#(!e'#)-#-e-&)1&3e ,)e ."#-e e .e e ,.e ) e **,)2#'.&3e >e ,)--)0,e *,e >==e '!--e *,e !(,.#)(e W&.-"/&,e.e&Qe?==EXQee"e-#!(# #(e) ee.)e!(.#e-./#-e) e"/'(e#---e#-e.".e

#(-.e ) e (e 2*(-#0e .,'#(.#)(e ) e ."e /&&e -+/(e ) e #(#0#/&-Re )(&3e , /&&3e -&.e0,#(.-e.!!#(!e."e,!#)(-e) e#(.,-.e(e.)ee.,'#(Qee

.e/-e)(-#,e.1)e#&&&#e&)#eWe(eXe(e."#,e&&&e ,+/(#-e*>Re*?Re*>e (e *?Qe e ."e .1)e &)#e ,e #(*((.e ) e "e ).",e W#QQRe #(e +/#&#,#/'Xe ."(e ."e

*,)#&#.3e) e)-,0#(!e(3e*#,e) e&&&-e.)!.",e#(e."e-'e",)')-)'e#-e."e*,)/.e ) e."e#(#0#/&e&&&e ,+/(#-eW+/.#)(e>XQe

e e

e e ^{( 1 )}

% e

)'')(e'.,#-e) ee,eReZe(e,?Qee"e-#'*&-.e) e."e'-/,-e#-e)0,#(ee W+/.#)(e?XQeW&e.e&Qe?==DXQee

e e e

e*,)&'e1#."e."#-e'-/,e#-e.".e#.e#-e*((.e)(e&&&e ,+/(#-e(e."/-e#.e#-e ().e /- /&e #(e )'*,#(!e # ,(.e *#,-e ) e &)#e 1#."e 0#.#(!e &&&e ,+/(#-Qe "e -)&/.e'2#'/'e0&/e) ee#-e."e-'&&,e) e*^>*^>e(e*^>*^?e1"(ee#-e*)-#.#0e(e."e -'&&,e ) e *^>*^>e (e *^>*^?e 1"(e e #-e (!.#0e W&e .e &Qe ?==DXQe e )(e *,)*)-e

**,)"e.)e'%ee'),e#(*((.e) e&&&e ,+/(#-e#-e.)e-&e."e0&/e) ee3e."e '2#'/'e0&/eW+/.#)(e@XQe

e

e e

eZe,(!-e ,)'ec>e.)e>Re),e&.,(.#0&3e-)&/.e0&/RebZbRe,(!#(!e ,)'e=e.)e>e(ee /-Qe Ze #-e '),e -/#.&e ),e )'*,#(!e *#,-e ) e &)#e 1#."e # ,(.e &&&e ,+/(#-e

&.")/!"eZe&-)e#-e-)'1".e*((.e)(e."e&&&e ,+/(#-eWZe.(-e.)ee#( &.e 1"(e)(e) e."e&&&-e#-e,,XQee

,"*-e."e')-.e/- /&e'-/,e) ee#(e--)#.#)(e-./#-e#-e."e-+/,e),,&.#)(e .1(e*,-(e(e-(e) e&&&-e#(ee*#,e) e#&&&#e&)#eW+/.#)(eAXeW&e.e&Qe

?==DXQe e

e e

"e'-/,e,^?e0,#-e.1(e4,)e(e)(Re)(e'(#(!e."e0,#(.-e)(03e."e-'e

#( ),'.#)(e (e 4,)e '(#(!e .".e ."e 0,#(.-e ,e #(*((.e ) e "e ).",Qe (e --)#.#)(e-./#-Re.",e#-ee#,.e,&.#)(-"#*e.1(e,^?e) e."e!().3*e',%,e(e /-.#0e0,#(.e(e-..#-.#&e*)1,e.)e..e--)#.#)(Qe'*&e-#4e1)/&e"0e.)ee

#(,-e3ee .),e) eNe>a,^?e.)e"#0e."e-'e-..#-.#&e*)1,e-e# e."e/-.#0e0,#(.e

"e(e!().3*e#,.&3eW,#.",ePe,41),-%#e?==>XQe

)'e#-.#(.#0e ./,-e.1(eZe(e,^?e(ee#(.# #Qe"ebZbe+/&-e>e# e."e ,+/(3e) e(3e) e."e )/,e*#,-e) e!().3*-e#-e=Qee eZeIe>Re.",e#-e().ee>==Ge),,&.#)(e .1(e ."e &&&e .e )(e &)/-e (e ."e &&&e .e ."e -)(e &)/-Qe e ,^?I>e ."(e .1)e

"*&).3*-e ,e ().e )-,0e (e .",e #-e e >==Ge ),,&.#)(e .1(e ."e &&&-e .e .1)e

e e ^{( 2 )}

e

e ^{( 3 )}

e

e ^{( 4 )}

&

&)/-Qe W&e .e &Qe ?==DXQe -e e -#'*&# #e ,/&e ) e ."/'Se Ze '#!".e e 0),e 1"(e

#( ),'.#)(e)(e"#-.),#e,)'#(.#)(e0(.-e#-e) e#(.,-.e(e,?e*,)0#-e#( ),'.#)(e)(e ."e),,&.#)(e) e."e.1)e&)#Qe"e'-/,'(.e) ee#(e# ,(.e)(.2.-e#-ee&,!e.)*#e (e 1#&&e ().e e /,.",e #-/--e ",Qe "e #(.,-.e ,,e '3e 1(.e .)e ,e ."e

*/&#.#)(eW,#.",ePe,41),-%#e?==>Xe(e /,.",e, ,(-e.",#(e ),e(e2*(-#)(e ) e."#-e.)*#Qee

5=4=6 &'%C.*!,!'&C,$'-+C

(e."e1%e) e."e #,-.e, .e) e."e"/'(e!()'Re."e (.,(.#)(&e**e,)$.e1-e

&/("e 1#."e e '#--#)(e .)e *,)0#e e .&)!/e ) e )'')(e "/'(e e 0,#.#)(e (e e

"*&).3*e '*e -")1#(!e ")1e .")-e 0,#(.-e #(",#.e .)!.",e #(e # ,(.e *)*/&.#)(-Qe

*&).3*e #-e #(e -e e *,.#/&,e )'#(.#)(e ) e 0,#(.e &&&-e &)(!e ."e -'e

",)')-)'Qee

"e #,-.e *"-e ) e ."e **e *,)$.e )(-.,/.e "*&).3*e '*-e 3e (&34#(!e

**,)2#'.&3e)(e)'')(ee#(e0,3eB%e,)--e."e!()'eW>R==DR@?FeXe) e?CFe

#(#0#/&-e ,)'e )/,e# ,(.e*)*/&.#)(-Qe"e-'*&-e1,eF=e#(#0#/&-eeW@=e*,(.-c ) -*,#(!e.,#)-Xe ,)'e),/Re#!,#ReF=e#(#0#/&-e1#."e/,)*(e(-.,3eW@=e*,(.-c ) -*,#(!e .,#)-Xe ,)'e ."Re Re ABe (e "#(-e ,)'e #$#(!e "#(e (e AAe #(#0#/&-e ,)'e)%3)Re*(eW"e (.,(.#)(&e**e)(-),.#/'e?==BXQe

(e."e-)(e*"-Re."e-'e#(#0#/&-e1,e/-Re/.e."ee)/(.e1-e#(,-e .)e )0,e @Q>e '#&&#)(Re 1"#"e 1-e -.#'.e .)e *./,e /(.3*e )'')(e 0,#.#)(e 1#."e ."e '2#'/'e,?e,(!#(!e ,)'e=QFe.)e=QCeW,4,e.e&Qe?==DXQe (e."e."#,e*"-Re."e-'*&e-#4e 1-e #(,-e .)e >R>EAe ,)'e >>e *)*/&.#)(-Qe ,e (e &)1e ,+/(3e -e 1,e &-)e

!().3*Qe"3e1,e"3*)."-#4e.)e2*&#(ee'),e-/-.(.#&e ,.#)(e) e",#.#&#.3e) e

#--e ,#-%-e ."(e )'')(e 0,#(.-e W&.-"/&,e .e &Qe ?=>=XRe 1"#"e "0e (e ."e )/-e ) e ')-.e !()'c1#e --)#.#)(e -./#-e .)e .e We "*.,e ?Q>QAXQe "e **e *,)$.e -.#'.e ,)'#(.#)(e ,+/(3e #(e # ,(.e *,.-e ) e ."e !()'e (e e &)%e &#%e -.,/./,e#(e."ee*..,(-e1-e)-,0Re1",e."e&)%e)/(,#-e,e) .(e-*,.e 3e,)'#(.#)(e").-*).-eW#!/,e>XQe

"e **e *,)$.-e ,.e '--#0e ')/(.-e ) e .e )(e "/'(e e 0,#.#)(e (e

")1e ."3e #(",#.e .)!.",e #(e # ,(.e *)*/&.#)(-Qe "#-e %()1&!e 1-e ,/#&e ),e ."e -#!(e ) e !()'c1#e e ,,3-Re ."e .))&-e .".e -.,.e ."e !()'c1#e --)#.#)(e -./#-e ) e )'*&2e #---Qe ./3e e #(e ."#-e ."-#-e 1-e *)--#&e )(&3e 1#."e ."e 0('(.-e#(e%()1&!e,)/!".e)(e3e."e**e*,)$.-Qe

e e e

'

e e

Figure 1. Illustration of the block-like structure of the human genome caused by linkage disequilibrium. A) Typical variation in 18 individuals. Six correlating variants on the left of the recombination hotspot form three different haplotypes (out of 64 possible haplotypes) as indicated by different colors. Recombination breaks the correlation, and the next six correlating variants form two different haplotypes. B) Regions depicted in A are scattered throughout the chromosomes forming LD blocks of different sizes. The correlations shown in the chromosome are fictitious (adapted from (Altshuler et al. 2008).

e

4333C&'%+C*'",C

"e&.-.e'$),e ),.e.)e",.,#4e"/'(e!(.#e0,#.#)(e"-e(e."e>===e()'-e

*,)$.e) e'),e."(eDBe/(#0,-#.#-e(e)'*(#-e1),&1#eW"e>===e()'-e,)$.e )(-),.#/'e?=>=XQe"e#'e#-e.)e#(.# 3e(e,.e/,.e"*&).3*e'*-e) e&&e-),.-e) e

"/'(ee*)&3'),*"#-'-e) e ,+/(3eKe>Ge(e)1(e.)ee ,+/(3e) e=Q>Ge#(e."e )#(!e ,!#)(-Qe "e #,-.e *"-e ) e ."e *,)$.e *, ),'e e &)1e )0,!e 1")&c!()'e -+/(#(!e ) e >DFe #(#0#/&-e ,)'e Ae *)*/&.#)(-Re "#!"c)0,!e -+/(#(!e ) e .1)e

*,(.-c"#&e .,#)-Re (e 2)(e -+/(#(!e ) e CFDe #(#0#/&-e ,)'e De *)*/&.#)(-Qe "e #,-.e

(

*"-e ,*),.e >Be '#&&#)(e -Re >e '#&&#)(e -"),.e #(-,.#)(-e ),e &.#)(-Re (e ?=R===e -.,/./,&e0,#(.-Qe(e-.,#%#(!e #(#(!e1-e.".e"e*,-)(Z-e!()'e)(.#(-e*/..#0e

&)--c) c /(.#)(e 0,#(.-e #(e -e '(3e -e ?B=c@==e !(-e 1),&1#e W"e >===e ()'-e ,)$.e)(-),.#/'e?=>=XQee

"e -)(e *"-Re #'e .)e )'*,"(-#0&3e ",.,#4e &)1e ,+/(3e WLBGXe 0,#(.-Re -+/(e >=F?e #(#0#/&-e ,)'e >?e *)*/&.#)(-Re #(&/#(!e F@e #((-e W"e >===e ()'-e ,)$.e )(-),.#/'e ?=>?XQe 0,&&Re @Ee '#&&#)(e -Re >QAe '#&&#)(e -"),.e #(-,.#)(-e (e

&.#)(-Re(e)0,e>AR===e&,!,e&.#)(-e1,e#(.# #Qe"e*,)$.e-")1e.".e1"#&e )'')(e0,#(.-e,e.3*#&&3e )/(e,)--e*)*/&.#)(-e(e)(.#((.-Re&)1e ,+/(3e(e ,,e 0,#(.-e ,e '),e ,-.,#.e .)e '$),e (-.,&e !,)/*-e WQ!QRe /,)*(-Xe ),e -#(!&e

*)*/&.#)(-Qe (.,-.#(!&3Re &)1c ,+/(3e 0,#(.-e W=QBcBGXe ,e (,#"e ')(!e #((-e -e )'*,e.)e).",e/,)*(e*)*/&.#)(-Qe

(e-./3e e) e."#-e."-#-Re."e#(.,#'e>===e()'-e"*&).3*e*(&eW"e>===e()'-e ,)$.e )(-),.#/'e ?=>?Xe 1-e /-e .)e #'*/.e &-)e &)1e ,+/(3e 0,#(.-Re #(-,.#)(-e ),e

&.#)(-e (e -.,/./,&e 0,#(.-e #(e e #((#-"e -'*&e ) e - e --e (e )(.,)&-Qe /,e

"3*)."-#-e1-e.".e-)'e&)1c ,+/(3e0,#(.-Re#(,-e#(e ,+/(3e#(e#(&(Re1)/&e )(.,#/.e.)e#(,-e#(#(e) e- ce#(e#(&(eW-e"*.,e?QAXQe

"e >===e ()'-e ,)$.e #-e (e )(c!)#(!e ),.Re /,,(.&3e #'#(!e .)e -+/(e ?RB==e

#(#0#/&-e ,)'e?De*)*/&.#)(-Qe"e.e!(,.e1#&&ee,/#&e ),e."e-#!(e) e(1e

!().3*#(!e .))&-e (e #'*/..#)(e ) e e 1#,e ,(!e ) e 0,#(.-e -#(e ."e )/-e ) e 1")&e

!()'e--)#.#)(e-./#-e1#&&e&#%&3e-"# .e.)1,-e&)1e ,+/(3e0,#(.-Qee

(%#(Z-e)&)--&e(0)/,e) e.,'#(#(!Re&.e&)(e/(,-.(#(!Re."e /(.#)(e(e )(-+/(-e ) e "/'(e !()'e 0,#.#)(e #-e (e )(!)#(!e ),.e 1#."e (e -.#'.e )(e '#&&#)(e #(#0#/&-e "0#(!e ."#,e /&&e !()'e -+/(e 3e ?=>Be W,()e &).#e *,-)(&e )''/(#.#)(Te(,-e/(+/#-.eW,,#-e?=>?XXeQee

e

^72.37" !#

Category Count Length (basepairs) 3,323,950,079

Coding genes 20,774

Non coding genes 22,493

Pseudogenes 14,145

Gene transcripts 194,846

SNPs, indels, somatic mutations 54,965,377 Structural variants 10,266,123

)

Table 2. Types of variations in the human genome Type Description Single nucleotide

polymorphism (SNP)

A change of one nucleotide in DNA.

Chromosomal abnormality

Insertion, deletion, translocation or reversal of a large (> 3Mb) parts of a chromosome.

Copy number variation (CNV)

A repetition of large (1kb - 3Mb) part of genome zero (deletion) or more times.

Interspersed element A repeating sequence of DNA, a remnant from viral genome. Some repeats contain sequence encoding viral machinery proteins required to copy and move the sequence.

Simple repeat A variable number repetition of a few nucleotide sequence.

Insertion or deletion (INDEL)

A change of addition or removal of one or more nucleotides.

Structural variant (SV) 1 kb and larger in size and can include inversions and balanced translocations or large insertions or deletions

5=4=7 ,-1!&C -%&C&'%C.*!,!'&CC

,#.#&#.3e #-e e '-/,e ),e *,(.e ) e 0,#.#)(e #(e e *"().3*e /e .)e !(.#e .),-e W,3e?==EXQe"e&--#&e13e) e----#(!e."e')/(.e) e!(.#e)(.,#/.#)(e.)e"/'(e

#---e ),e *"().3*-e #-e .1#(e -./#-Qe -e ')()43!).#e (e #43!).#e .1#(-e -",e >==Ge (e B=Ge ) e ."e !()'-Re ,-*.#0&3Re (e # e )."e -",e -#'#&,e (0#,)('(.-Re ."(e ."e

!(.#e &)e )(e ."e *"().3*e (e e -.#'.e 3e -./3#(!e ."e *"().3*e # ,(e .1(e."e.1#(-Qe"e)(),(e) e)'*&2e#---e#(e')()43!).#e.1#(-e#-e) .(e ,e ,)'e >==GRe -/!!-.#(!e .".Re #(e #.#)(e .)e (0#,)('(.&e .-Re &-)e *#!()'#e

# ,(-e '3e )(.,#/.e .)e *"().3*e 0&)*'(.e ),e )'*&2e #--e -/-*.##&#.3e W&&ePe*.),e?=>>XQe"e.1#(e-./#-e) ,e)(&3e%()1&!e)/.e."e",#.#&#.3e) e."e

*"().3*e(e'.")-e) e&#(%!e(e--)#.#)(e-./#-e(ee/-e.)e'*e."e!()'#e

&)#e",)/,#(!e0,#(.-e .#(!e."e*"().3*-Qee

!& &#& ((

(e &#(%!e -./#-Re -!,!.#)(e ) e !(.#e ',%,-e -..,e .",)/!")/.e ."e !()'-e #-e ),,&.e .)e ."e -!,!.#)(e ) e #--e #(e *#!,-Qe (e -"),.)'#(!e #-e .".e &#(%!e (&3-#-e#(e)'*&2e.,#.-e(e)(&3e'*e!(.#e&)#e,)&3e(e."e&#(%!e#(.,0&-e(e )(.#(e "/(,-e ) e !(-Re ."/-e ."e /(,&3#(!e '/..#)(-e ,e ().e (--,#&3e -#&3e

#(.# #&eW,ePe,,..e?==BXQe

!& &#&! ((((

(e--)#.#)(e(&3--Re-&.e!(.#e',%,-e,e),,&.e.)e-c)(.,)&e-../-e#(ee -'*&e ) e --e (e )(.,)&-e ),e .)e +/(.#..#0e *"().3*e #(e e *)*/&.#)(e )"),.Qe "e )(.,)&-e -")/&e e -e -#'#&,e .)e ."e --e -e *)--#&Re # ,#(!e )*.#'&&3e )(&3e 3e ."e

*"().3*e ),e #--e -../-Qe "e )"),.-e -")/&e /-/&&3e e /(,&.e #(#0#/&-Re /.e

*#!,e-e(&3-#-e#-e&-)e*)--#&eW&e.e&Qe?==DXQee

!

,#.#)(&&3Re ."e (#.e !(e **,)"e 1-e /-e 1",e )(e ),e e 1e !(-e 1,e -&.Re-e)(e*)-#.#)(&e0#(e ,)'e&#(%!e-./#-e),e /(.#)(&e"3*)."--e)/.e

*/..#0e-/-*.##&#.3e!(-Qe(.#e',%,-e1,e."(e-&.e')(!e*,0#)/-&3e%()1(e 0,#&e!(.#e',%,-eW#,-""),(e.e&Qe?==?XQe"e)0#)/-e-"),.)'#(!e#-e."e(e) e

#(-#!".e ),e *,#),e %()1&!e )/.e ."e *."13-e (e !(-e &#%&3e --)#.e .)e ."e

*"().3*e-./#Re(Re)(-+/(.&3Re'(3e()0&e--)#.#)(-e,e&#%&3e.)ee'#--Qee

!& &#&" '(((

(e,(.e3,-Re."e!()'c1#e--)#.#)(e-./3eWXe**,)"e"-e(e."e'.")e ) e")#e#(e"/'(e!(.#e-./#-Qe (e-Re-e#(e."e(#.e!(e**,)"Re!(.#e ',%,-e ,e ),,&.e .)e *"().3*e #(e --e W .Xe (e )(.,)&-e W/( .Xe ),e #(e

*)*/&.#)(e)"),.-e1#."e*"().3*-e) e#(.,-.Qe (-.e) e"0#(!e/.e!/---e)/.e (#.e!(-e(e*."13-Re!(.#e',%,-e&&e,)/(e."e!()'e,e/-Qe3*#&e e,,3-e)(.#(e ,)'ee 1e"/(,e.")/-(e.)ee 1e'#&&#)(e-e(e-.,/./,&e 0,#(.-Re (e "e ) e ."-e #-e ),,&.e .)e ."e *"().3*e ) e #(.,-.Qe "e e

!().3*#(!e "#*-e ,e )'',#&&3e 0#&&e ,)'Re Q!QRe &&/'#(e (e 3'.,#2e 1")-e

"#*-e# ,e#(e")1e."e-e,e-&.Qe 3'.,#2e-&.-e-e-..,e0(&3e,)/(e ."e !()'e 1",-e &&/'#(e /--e e #( ),'.#)(e ) e ."e **e e *)*/&.#)(e .)e

"#0e -.#- .),3e .!!#(!e )0,!e ) e )'')(e 0,#.#)(-Qe (e '$),e &#'#..#)(e ) e ."e '$),#.3e ) e -e "-e (e .".e ')-.e )'',#&e !().3*#(!e *&. ),'-e (e ,&#&3e ..e)(&3e)'')(e-e.eKeBGe ,+/(3Qe&-)Re."e-&.#)(e) e-e'3e().e.!e1&&e 0(e."e)'')(e0,#.#)(e#(ee!#0(e*)*/&.#)(Qe),e,(.&3Re."e ,+/(3e-*.,/'e

"-e(e2*(e3e!().3*#(!e,,3-e )/-e)(e."e2)'-eW/3!"e.e&Qe?=>@Xe),e)(e ."e &)#e -&.e ),e '.)&#e W.)"#*Xe W)#!".e .e &Qe ?=>?Xe ),e #''/(e ,&.e W ''/()"#*XeW3,e.e&Qe?=>?Xe.,#.-Qe

"e (/',e ) e */&#-"e -e "-e -.#&3e #(,-e ),e ."e &-.e Be 3,-Re .).&&#(!e

&')-.e>B==e-./#-e) e)0,e?==e# ,(.e*"().3*-eW#(), e.e&QXeW$!2*XQe"e!(,&e )/.)'e) e."e-./#-e#-e.".e."e--)#.e-e)(&3e'),.&3e#(,-e."e,#-%e) e."e

#--e -./#Re (e ."e #(.# #e -e 2*&#(e )(&3e e *,)*),.#)(e ) e ."e ",#.#&#.3e -.#'.e ,)'e.1#(e-./#-Qee

),e 2'*&Re #(e "/'(e "#!".Re 1#."e (e -.#'.e ",#.#&#.3e ) e E=GcF=GRe ."e >E=e --)#.e e &)#e 2*&#(e )(&3e )/.e >=Ge ) e ."e ",#.#&#.3e W&&(e .e &Qe ?=>>XQe )10,Re#.e"-e(e-.#'.e.".e-e'/"e-eABGe*,(.e) e."e*"().3*#e0,#(e) e

"#!".e(ee*./,e3e/-#(!e&&e) e."e0,#(.-e#(e."e!().3*#(!e,,3e(e().e$/-.e."e 0,#(.-e ,"#(!e -.,#(!(.e !()'c1#e -#!(# #(e W(!e .e &Qe ?=>>XQe "-e .3*-e ) e '/&.#',%,e*,#.#0e*(&-e(e.)ee0&/.e, /&&3e-e."3e.3*#&&3e,e().e&e .)e 2*&#(e -e '/"e ) e ."e *"().3*#e 0,#(-e #(e #(*((.e ,*&#.#)(e -./#-e W%)1-%3e.e&Qe?=>>XQe .e(0,."&--e-'-e.".e'(3e.,/e,#-%e0,#(.-eW1#."e-'&&e,#-%e .Xe2#-.-e.".e"0e().e,"e."e-.,#(!(.e-..#-.#&e.",-")&-e#(e-Qeeee

!!

#'#&,ee #(#(!-e**&3e.)e&--e",#.&e)'*&2e"/'(e#---e-/"e-e#-"'#e -.,)%eW0(e.e&Qe?=>?XRe)-#.3Re(e'(.&e#-),,-eW"#4)*",(#Re#*)&,e#-),,Xe W#--",e .e &Qe ?=>?XQe !c,&.e '/&,e !(,.#)(e #-e e -.,#%#(!e 2*.#)(e #(e 1"#"e )/.eB=Ge) e."e",#.#&#.3e#-e2*&#(e3e)(&3e #0e)'')(e-eW&&,e.e&Qe?==CXQe ().",e-/--e-.),3e#-e."e#(.# #.#)(e) e>C@e&)#e--)#.e.)e."e#( &''.),3e)1&e

#--Re'),e."(e.)e(3e).",e)'*&2e#--e.)e.Re)/(.#(!e ),e>@QCGe) e#--e 0,#(e#(e,)"(Z-e#--eW)(e) e."e.1)e'$),e-/.3*-e) e#( &''.),3e)1&e#--Xe W)-.#(-e.e&Qe?=>?XQee)10,Re0(e#(e."e-e) e,&#&3e,*&#.e--)#.#)(-e1#."e"#!"e )-e,.#)-Re."e*,#.#0e#&#.3e) e."e#(.# #e0,#(.-e#(e)'')(e)'*&2e#---e#-e

&)1eW%)-)..#,e.e&Qe?==FXQe

&.")/!"e."ee**,)"e"-e(e-/-- /&e#(e#(.# 3#(!e(/',)/-e)(-#-.(.&3e ,*&#&e-e--)#.e.)e)'*&2e"/'(e#---e),e.,#.-Re)(0,.#(!e."-e #(#(!-e .)e e ')&/&,e /(,-.(#(!e ) e 0,#)/-e #--e '"(#-'-e "-e (e "&&(!#(!Qe (e '(3e-e."e(,-.e!(e.)e."e0,#(.-e,e()'#(.e-e-/-*.##&#.3e!(-Qe(&3e )/.eBGe) e."e.,#.e--)#.e0,#(.-e,e()(c-3()(3')/-e)#(!e0,#(.-Re(e')-.e) e ."'e ,e #(.,!(#e WA@GXe ),e #(.,)(#e WABGXe W#(), e .e &Qe ?==FXQe "e *,)&'e #(e ()'#(.#(!e."e*"3-#&&3e&)--.e!(e-e."e-/-*.##&#.3e!(e#-e2'*&# #e3e."e1&&e

%()1(e e /-#(!e /&.c.3*e "3*)&.-#e W(.."e .e &Qe ?==?XQe "e (,-.e --)#.e e,-#-e#(e(e#(.,)(e) ee!(e/(,&.e.)e."e*"().3*Re&')-.e>A%e13e ,)'e."e

&.-c*"&),#4#(e"3,)&4eW Xe!(Qe"e(43'e*,)/.e) e e,%-e)1(e&.)-Re (e-#&(#(!e) ee/--e"3*)&.-#Qe-*#.e#(!e#-.(.e.)e Re."e--)#.ee )0e #-e -.,)(!&3e --)#.e .)e ."e .,(-,#*.#)(&e ,!/&.#)(e ) e ."e e 2*,--#)(e W(.."e.e&Qe?==?XQee

(e -/'',3Re 0(e .")/!"e -e #(e '(3e )'*&2e "/'(e #---e "0e *,)/e

#(.,-.#(!e ,-/&.-Re -/!!-.#(!e #)&)!#&e *."13-e #(0)&0e #(e ."e *.")*"3-#)&)!3e ) e 0,#)/-e )'*&2e #---Re )&&)1c/*e -./#-e ,e (e .)e .,(-&.e ."-e #(#.#&e #(#(!-e

#(.)e'"(#-.#e#)&)!#&e%()1&!e.".e*0-e."e13e ),e()0&e.))&-e ),e."e*,#.#)(Re

#!()-#-Re(e.",*3e#,.e.e."e#--Qe e

!"

e ^{Figure 2.}

Significant associations (p<5 x 10-8 ) identified in genome-wide association studies in 18 categories of human traits and diseases (Modified from www.genome.gov/GWAStudies). e

e

!#

!& &#&# ((

"e .e.".ee#(.# #e0,#(.-e2*&#(e)(&3ee ,.#)(e) e."e",#.#&#.3e"-e(e .,'e['#--#(!e",#.#&#.3\Ree.)*#e) e'/"e.e#(e."e-#(.# #e)''/(#.3eW",e

?==ETe()&#)e.e&Qe?=>=XQe"e*,)*)-e/--e#(&/e."e*)--##&#.3e.".e/(.3*e)*3e (/',e0,#(.-e)/&ee."e0,#(.-e,,3#(!e'#--#(!e",#.#&#.3eW",e?==ETe()&#)e .e &Qe ?=>=XQe /./,e 2)'e ),e /&&c!()'e -+/(#(!e *,)$.-e ,e &#%&3e .)e -"e &#!".e )(e ."#-Qe ().",e 2*&(.#)(e *,)*)-e #-e .".e ,,e 0,#(.-Re #( ##(.&3e .!!e 3e -e

#(&/e#(e."e/,,(.ee!().3*#(!e,,3-Re 1)/&e 2*&#(e ."e '#--#(!e ",#.#&#.3e W",e ?==ETe ()&#)e .e &Qe ?=>=XQe +/(#(!e -./#-e (e *,)$.-e -/"e -e ."e >===e ()'-e ,)$.e 1#&&e &/#.e ."#-e *)--##&#.3Qe "e &)1,e ,+/(3e 0,#(.-e ..e #(e ."e>===e()'-e,)$.e,e)(e) e."e),(,-.)(-e) e./3e e#(e."#-e."-#-Qee/,.",e 2*&(.#)(-e -/!!-.e .".e .",e ,e '(3e /(#-)0,e 0,#(.-e 1#."e -'&&,e .e -#4-e ."(e (e e ..e 3e /,,(.e e -./#-e ),e ."e .-e ,e ')# #e 3e ).",e &)#e (a),e(0#,)('(.Re,/#(!e."e*)1,e.)e..e--)#.#)(-eW",e?==ETe()&#)e.e&Qe

?=>=XQe "e .e .".e ."e &)#e -/,*--#(!e ."e -.,#(!(.e !()'c1#e -#!(# #(e 2*&#(e '/"e&--e) e."e0,##&#.3e."(e)(-#,#(!e&&e."e0,#(.-e.)!.",e#(e."e,,3e-/!!-.-e .".e e !,.e (/',e ) e &-e (!.#0-e #(e e -./#-e 2*&#(e *,.e ) e ."e '#--#(!e

",#.#&#.3e W(!e .e &Qe ?=>>XQe "e #(.# #.#)(e ) e ."-e &)#e 1)/&e ,+/#,e '/"e &,!,e -'*&e -#4-Qe .e "-e &-)e (e -/!!-.e .".e *)*/&.#)(e #-)&.-Re *).(.#&&3e (,#"e #(e /(#+/e0,#(.-Re,e) e0&/e#(e/()0,#(!e-)'e) e."e"#(e",#.#&#.3Qe"#-e**,)"e

"-e &,3e (e -/- /&e #(e /()0,#(!e &)#e .".e --)#.e .)e '.)&#e .,#.-e #(e ."e

#((#-"e*)*/&.#)(e#-)&.eW..#e.e&Qe?==FXQe"#-e*)--##&#.3e#-e/.#&#4e#(e./3e e) e."e

*,-(.e."-#-Qee

!& &#&$ ((((((

"e &.-.e ."()&)!#&e 0('(.e #(e "/'(e !()'#e -./#-e #-e (2.c!(,.#)(e -+/(#(!e WXe W.4%,e ?=>=XQe "e e -+/(#(!e )-.-e "0e *&/''.e ,)'e ,)/(e O>===e *,e '!-e #(e ?==Be .)e $/-.e )/.e .(e (.-e *,e '!-Re (e ."-e ."(#+/-e "0e )'e 1#&3e 0#&&e &-)e )/.-#e ) e &,!e !()'e (.,-e W..,-.,(e?=>@XQe+/(#(!e) e."e2)'e),e."e /&&e!()'e&&)1-e#(.,,)!.#)(e) ee )'*&.e-.e) e0,#(.-eW#(&/#(!e,,e)#(!e0,#(.-e1#."e*)--#&3e&,!e .-Xe(e().e

$/-.e."e-.e) e0,#(.-e-&.e ),ReQ!QReee"#*Qe2)'e-+/(#(!e"-e&,.e ."e#(.# #.#)(e) e'/..#)(-e/-#(!e(&#(e#---eW'-"e.e&Qe?=>>XRe(e"-e (e**&#e.)e."e-./3e) e2%e'/..#)(-e*)--#&3e/-#(!e(/,)&)!#&e#---e-/"e -e/.#-'eWZ)%e.e&Qe?=>>XQe",e#-e&-)e#(.,-.e.)e**&3e2)'e-+/(#(!e#(e."e-./3e ) e )'*&2e #---e W#4/(e .e &Qe ?=>?XQe "e --)#.#)(e ) e ,,e 0,#(.-e #(.# #e 3e -+/(#(!e 1#."e )'*&2e #---e (e .,#.-e (--#..-e &,!e -'*&e -#4-e ) e ,)/(e

>=R===e*,.##*(.-e.)e"#0e-/ ##(.e-..#-.#&e*)1,eW#4/(e.e&Qe?=>?XQe/&&e!()'e -+/(#(!e "-e (e '#(&3e **&#e #(e -)'.#e '/..#)(e ..#)(e #(e (,e -./#-e